PCR, ose reaksioni zinxhir i polimerazës, është një teknikë e përdorur për të amplifikuar sekuencat e ADN-së.Ai u zhvillua për herë të parë në vitet 1980 nga Kary Mullis, i cili u nderua me Çmimin Nobel në Kimi në 1993 për punën e tij.PCR ka revolucionarizuar biologjinë molekulare, duke u mundësuar studiuesve të amplifikojnë ADN-në nga mostrat e vogla dhe ta studiojnë atë në detaje.
PCR është një proces me tre hapa që zhvillohet në një ciklues termik, një makinë që mund të ndryshojë me shpejtësi temperaturën e një përzierjeje reaksioni.Tre hapat janë denatyrimi, pjekja dhe zgjatja.
Në hapin e parë, denatyrimin, ADN-ja me dy fije nxehet në një temperaturë të lartë (zakonisht rreth 95°C) për të thyer lidhjet hidrogjenore që mbajnë të dy fijet së bashku.Kjo rezulton në dy molekula të ADN-së me një zinxhir.
Në hapin e dytë, pjekjen, temperatura ulet në rreth 55°C për të lejuar primerët të pjekjen ndaj sekuencave plotësuese në ADN-në me një fije floku.Primerët janë pjesë të shkurtra të ADN-së që janë krijuar për të përputhur sekuencat e interesit në ADN-në e synuar.
Në hapin e tretë, zgjerimi, temperatura ngrihet në rreth 72°C për të lejuar polimerazën Taq (një lloj polimeraza e ADN-së) të sintetizojë një varg të ri të ADN-së nga abetaret.Polimeraza Taq rrjedh nga një bakter që jeton në burime të nxehta dhe është në gjendje të përballojë temperaturat e larta të përdorura në PCR.
Pas një cikli PCR, rezultati është dy kopje të sekuencës së synuar të ADN-së.Duke përsëritur tre hapat për një numër ciklesh (zakonisht 30-40), numri i kopjeve të sekuencës së synuar të ADN-së mund të rritet në mënyrë eksponenciale.Kjo do të thotë që edhe një sasi e vogël e ADN-së fillestare mund të përforcohet për të prodhuar miliona apo edhe miliarda kopje.
PCR ka aplikime të shumta në kërkime dhe diagnostike.Përdoret në gjenetikë për të studiuar funksionin e gjeneve dhe mutacioneve, në mjekësi ligjore për të analizuar provat e ADN-së, në diagnostikimin e sëmundjeve infektive për të zbuluar praninë e patogjenëve dhe në diagnozën prenatale për të kontrolluar çrregullimet gjenetike te fetuset.
PCR është përshtatur gjithashtu për përdorim në një sërë variacionesh, të tilla si PCR sasiore (qPCR), e cila lejon sasinë e ADN-së që duhet të matet dhe PCR e transkriptimit të kundërt (RT-PCR), e cila mund të përdoret për të amplifikuar sekuencat e ARN-së.
Pavarësisht nga aplikimet e shumta, PCR ka kufizime.Kërkon njohuri për sekuencën e synuar dhe hartimin e abetareve të duhura dhe mund të jetë i prirur për gabime nëse kushtet e reagimit nuk optimizohen siç duhet.Megjithatë, me projektimin dhe ekzekutimin e kujdesshëm eksperimental, PCR mbetet një nga mjetet më të fuqishme në biologjinë molekulare.
Koha e postimit: Shkurt-22-2023